─=≡Ξ║ علوم آزمایشگاهی ║Ξ≡=─
صفحات وبلاگ
نویسنده: افضل نیا - پنجشنبه ٢۸ دی ۱۳٩۱

روش تهیه معرف های VP

- تهیه آلفا نفتول (معرفA):

پودرآلفا نفتول: g 5

اتانول: cc100

 

-تهیه  KOH(پتاس) (معرفB):

KOH:g 40

کراتین (cr): g 3/0

آب‌مقطر: cc100

معرف ها در ظروف تیره و در یخچال نگهداری می‌شوند. چون دارای پایداری متغیر هستند لازم است به طور هفتگی (بر حسب میزان کار) کنترل کیفی گردند.

 

روش تهیه معرف متیل رد (MR)

پودر متیل رد= g 1/0

اتانول=cc 300

پودر متیل رد را در اتانول حل کرده سپس با آب‌ مقطر حجم آنرا به cc500 برسانید. معرف در ظرف تیره و در یخچال نگهداری می‌شود. چون دارای پایداری متغیر است، لازم است بطور هفتگی (بر حسب میزان کار) کنترل کیفی گردد.

 

روش تهیه معرف کواکس

P-دی متیل آمینو بنز آلدئید= g10

آمیل الکل: cc150

اسید کلریدریک غلیظ و تازه: cc50

 

دی متیل آمینو بنزآلدئید را به آمیل الکل اضافه نموده و به آرامی اسید کلریدریک را به آنها اضافه نمایید. برای تهیه این معرف از هود استفاده نمایید. معرف در ظروف تیره و در یخچال نگهداری می شود. چون دارای پایداری متغیر است، لازم است بطور هفتگی (برحسب میزان کار) کنترل کیفی گردد.

روش تهیه معرف کلرور فریک

کلرور فریک= g10

آب‌ مقطر = cc100 (روش غیر اسیدی)

(روش دیگر تهیه این معرف شامل کلرور فریک:g 12، اسید کلریدریک غلیظ:cc 5/2 و آب ‌مقطرcc 100 می‌باشد، که این روش، روش اسیدی است). معرف در ظروف تیره و در یخچال نگهداری می‌شود. چون دارای پایداری متغیر است، لازم است بطور هفتگی (برحسب میزان کار) کنترل کیفی گردد.

روش تهیه معرف های احیاء نیترات

-تهیه معرف A:

N،N  دی متیل آلفا نفتیل آمین: g6

 اسیداستیک گلاسیالN5، (30% )cc :1000

 مقدار فوق از N، N دی متیل آلفا نفتیل آمین را در کمتر از cc1000 اسید استیک گلاسیال N5 حل کرده و کمی حرارت ملایم دهید تا حل شود. حجم را به یک لیتر رسانیده، محلول را از صافی رد کنید.

-تهیه معرف B:

سولفانیلیک اسید (P- آمینو بنزن سولفونیک اسید): g8

اسیداستیک گلاسیال N5، (30% ): cc 1000

مقدار فوق از سولفانیلیک اسید را در کمتر از cc 1000 اسیداستیک حل کرده و سپس حجم را به یک لیتر برسانید. معرف ها در ظروف تیره و در یخچال نگهداری می شوند. آلفا نفتیل آمین سرطان زا است.

 

روش تهیه معرف نین هیدرین

پودر نین هیدرین=  g5/3

استن=  cc50

بوتانول =  cc50   

استن و بوتانل را مخلوط کرده و سپس پودر نین هیدرین را اضافه نمایید. معرف در ظرف تیره و در دمای اتاق نگهداری می شود. درب آن باید کاملاً محکم بسته شود.

 

روش تهیه ویتامین K1

پودر ویتامین  =k1 g2/0

اتانول= cc20

محلول در ظرف تیره و در یخچال نگهداری می‌شود. درب ظرف باید کاملاً محکم بسته شود. غلظت نهایی محلول g/mlµ 1/0 برای محیط های مایع و g/mlµ10 برای محیط های آگاردار است. g2/0 پودر ویتامین K1 را روی یک قطعه کوچک فویل آلومینیومی استریل وزن کرده و در شرایط آسپتیک به ml20 اتانول در یک بطری استریل اضافه کنید. برای رقیق سازی بیشتر از آب‌ مقطر استریل استفاده کنید. محلول ذخیره  mg/ml10 است. ml1 از محلول ذخیره را به یک لیتر آگار و ml/l 01/0 براث اضافه کنید. محلول را دور از نور و در یخچال ذخیره کنید.

روش تهیه همین(Haemine)

پودر همین= g 5/0    

سود (NaOH)N 1= cc10

مقدار فوق از پودر همین را به cc10سود 1 نرمال اضافه کرده و حل کنید، سپس با آب ‌مقطر به حجم cc100برسانید. در شرایط 15 دقیقه، oC121، فشار  Lb15 در اتوکلاو استریل ‌نمایید.

محلول در ظرف تیره و در یخچال نگهداری می شود. این محلول ذخیره mg/ml 5 غلظت دارد، ولی هنگام مصرف به عنوان ساپلمنت، باید دارای غلظت نهایی µg/ml 5 باشد.

 

روش تهیه آب اکسیژنه (H2O2) 3%

محلول آب اکسیژنه 30% را به نسبت 1:10 با آب ‌مقطر رقیق نمایید. (یعنی cc1 آب اکسیژنه 30% را به cc9 آب‌مقطر اضافه ‌نمایید). محلول در ظرف تیره و در یخچال نگهداری می شود.

روش تهیه کریستال ویوله ذخیره و اگزالات آمونیوم ذخیره

-تهیه کریستال ویوله

پودر کریستال ویوله = g20

اتانول= cc100

-تهیه اگزالات آمونیوم

پودر اگزالات آمونیوم= g1

آب‌ مقطر= cc100

هنگام مصرف، محلول کریستال ویوله ذخیره را به نسبت 1:10 با آب‌ مقطر رقیق ‌نمایید.
(cc1 از محلول کریستال ویوله و cc 9 آب‌ مقطر) سپس این محلول را با چهار حجم از
محلول اگزالات آمونیم رقیق کنید (cc1 محلول کریستال ویوله رقیق شده و cc4 اگزالات آمونیم).

محلول ذخیره و مصرفی کریستال ویوله، در ظرف تیره و در دمای اتاق نگهداری می‌شود.

 

روش تهیه لوگل

ید= g1

یدور پتاسیم =g 2

آب ‌مقطر= cc240

محلول آبی بیکربنات سدیم5%= cc60

در مقدار کمی از آب‌ مقطر، ید و یدور پتاسیم را کاملاً حل نمایید، بعد حجم را با آب‌ مقطر به cc240‌ برسانید. محلول 5% بیکربنات سدیم (بیکربنات سدیم: g5   آب ‌مقطر: c100) را نیز به آن اضافه ‌نمایید. محلول در دمای اتاق نگهداری می شود . درب آنرا باید کاملا" محکم ببندید.

روش تهیه محلول الکل-استون

اتانول= cc250

استون= cc250

حجم مساوی از الکل اتیلیک (اتانول) را با استون مخلوط نمایید.

 

روش تهیه فوشین/ یا سافرانین ذخیره

پودر فوشین= g2

اتانول= cc100

و یا

پودر سافرانین= g5/2

اتانول= cc100

به هنگام مصرف، محلول ذخیره فوشین یا محلول ذخیره سافرانین را به نسبت 1:10 با آب‌ مقطر رقیق نمایید. محلولها در ظروف تیره، تهیه و در دمای اتاق ذخیره می شوند.

نویسنده: افضل نیا - پنجشنبه ٢۸ دی ۱۳٩۱

1-        هدف: 

تهیه محیط های کشت استریل جهت رشد و جداسازی سویه های میکروبی از نمونه های مربوط به بیمار

2-      تعاریف و اصطلاحات:

شرایط آسپتیک: ایجاد شرایط سترون با کار کردن در کنار شعله و رعایت نکات لازم جهت جلوگیری از آلودگی نمونه

3-      شرح اقدامات:

3-1)  آب:

آب مورد استفاده باید دارای کیفیت مناسب باشد، یعنی عاری از موادی باشد که می توانند از رشد میکروارگانیسم ها جلوگیری کنند (یونهای فلزی سمی مثل مس) یا در شرایط آزمایش بر رشد آنها تاثیر بگذارند. آب خوب و تازه باید از راه تقطیر یا دیونیزاسیون تهیه شود. برای نگهداری آب مقطر باید از ظروفی استفاده شود که از مواد خنثی تهیه شده اند (شیشه خنثی، پلی اتیلن و غیره). ضریب هدایت آب باید کمتر از μs 15 باشد.pH  آب معمولا" کنترل نمی  شود مگر آنکه مشکلی در pH محیط های کشت تهیه شده بوجود آید. ممکن است آب دارای مقادیر زیادی میکروارگانیسم باشد، بنابراین توصیه می شود از آبی استفاده شود که تعداد میکروارگانیسم آن کم است .


ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - پنجشنبه ۱۳ مهر ۱۳٩۱

سِل به زبان فارسی دری «توبر کلوز» یک بیماری واگیردار است. باسیل این بیماری میکوباکتریوم توبرکلوزیس یا باسیل کخ نام دارد زیرا که در سال ۱۸۸۲ (میلادی) پرفسور رابرت کخ دانشمند آلمانی آن را کشف کرد. نوعی از این بیماری که به سل گاوی موسوم است، میان انسان و چهارپایان مشترک است.

این بیماری در کشورهای جهان سوم از معضلات بهداشتی است. مرض سل یا توبرکلوز (به اختصار تی‌بی) یکی از بیماریهای مهلک در جهان است که عامل آن مایکوباکتریوم‌ها یا به طور دقیقتر میکوباکتریوم‌های سلی است. در بیماری سل معمولاً ششها مورد حمله قرار می‌گیرند، این نوع سل را تی‌بی ریوی نیز گویند ولی از سایر اعضای درگیر در سل می‌توان سیستم عصبی مرکزی، غدد لنفاوی و گردش خون، دستگاه تناسلی و ادراری، دستگاه گوارش و معده، استخوان‌ها، مفاصل و پوست را نام برد. سایر میکوباکتریوم‌ها مانند بوویس، افریکنم، میکرتی و کانتی نیز باعث بیماری می‌شوند ولی نادر هستند. از انواع نشانه‌های سل می‌توان به سرفه مزمن همراه با خلط سینه آغشته به خون، تب، تعریق شبانگاهی و کاهش وزن اشاره کرد. سل را می‌توان با رادیوگرافی قفسه سینه، تست پوستی توبرکولین، بررسی میکروسکوپی خلط و کشت میکروبی خلط و مایعات بدن در آزمایشگاه تشخیص داد.

درمان سل مشکل است و به دوره‌های طولانی و استفاده از آنتی بیوتیک‌های متفاوت نیاز دارد همچنین باید رفتار و تماس افراد کنترل شود. گونه‌های مقاوم به آنتی بیوتیک مایکوباکتریوم در سال‌های اخیر درمان سل را با مشکل روبه رو کرده‌است.


ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - جمعه ٢ تیر ۱۳٩۱

مقدمه

همانگونه که می دانیم هلیکوباکتر پیلوری ( Helicobacter pylori ) یک باکتری پاتوژن انسانی است که در معده انسان کلونیزه می شود. عفونت با این باکتری در کشورهای در حال توسعه بیشتر دیده شده و افراد غالباً در سنین پایین به این باکتری آلوده می شوند. در این جریان، فاکتورهای مختلفی از جمله شرایط اقتصادی – اجتماعی ، بهداشت فردی ، آگاهی مردم و ... نقش مهمی را ایفا می کنند. راه های انتقال باکتری متفاوت است ولی تحقیقات متعدد نشان می دهد که ارگانیــسم عمدتاً در اثر تماس مستقیم ( شخص به شخص ) در درون خانواده صورت می گیرد. در این میان، انتقال بین نوزادان شیرخوار بیشتر از کودکان و نوجوانان می باشد. همچنین آقای Benner فرضیه انتقال باکتری بین زن و شوهر را نیز مطرح نمود.  از نظر اپیدمیولوژی، عفونت به این باکتری در سرتاسر جهان دیده می شود. طیف علائم بالینی ایجاد شده از گاستریت مزمن تا سرطان معده متفاوت است. سازمان بهداشت جهانی ( WHO ) هلیکوباکترپیلوری را به عنوان عامل کارسینوژن تیپ I معرفی نموده اســـت. باکتری علاوه بر ایجاد بیماری در بافت معده، ممکن است در خارج از دستگاه گوارش نیز به صورت یک پاتوژن عمل کند. در این مقاله به چندین بیماری که ارتباط آن با H.pylori  مشخص شده اشـاره خواهد شد.


ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - دوشنبه ٢٩ خرداد ۱۳٩۱

www.danesh-zist.blogfa.com

مدل سازی رایانه‌ای از هلیکوباکتر پیلوری که در معده انسان زندگی می‌کنند

هلیکوباکتر پیلوری، یک باکتری گرم منفی که در سطح مجرایی پوشش معده دیده می‌شود، اولین بار در سال 1983 توسط وارن (Warren) و مارشال (Marshall) یافت شد . این باکتری التهاب مزمن مخاط زیرین را القا می‌کند. عفونت معمولاً در سال‌های اول عمر کسب می‌شود و در صورت عدم درمان، پایدار می‌ماند. شیوع عفونت در سنین بالاتر و در افرادی که کودکی خود را در وضعیت اجتماعی- اقتصادی پایین سپری کرده‌اند، بیشتر است و بنابراین در نقاط مختلف جهان بسیار گوناگون است. تصور می‌شود شیوع بالاتر در سنین بالاتر، نتیجه اثر همگروهی ناشی از شرایط پایین‌تر زندگی کودکان در دهه‌های گذشته باشد. حداقل 50 جمعیت انسانی جهان، عفونت هلیکوباکتر پیلوری دارند. این ارگانیسم قادر است در محیط اسیدی معده زنده بماند. بخشی از این توانایی، محصول فعالیت بسیار بالای اوره‌آزی باکتری است؛ اوره‌آز، اوره موجود در شیره معده را به آمونیاک قلیایی و دی اکسید کربن تبدیل می‌کند.

عفونت با هلیکوباکتر پیلوری، کوفاکتوری در ایجاد سه بیماری مهم دستگاه گوارش فوقانی است: زخم دوازدهه یا معده (که بر اساس گزارش‌ها در 10-1 بیماران آلوده ایجاد می‌شود)، سرطان معده (3-1/0)، و لنفوم بافت لنفویید مخاط معده (MALT) (کمتر از 01/0). خطر این پیامدها در بیماران آلوده در بین جمعیت‌های مختلف گوناگونی زیادی دارد. اکثریت بیماران دچار عفونت هلیکوباکتر پیلوری هرگز دچار عوارض مهم بالینی نخواهند شد.
زخم‌های معده و دوازدهه در بیماران مبتلا به زخم دوازدهه، التهاب مخاط معده ناشی از عفونت، در ناحیه آنتروم معده شدیدتر است. آنتروم معده اسید ترشح نمی‌کند و مسؤول آزادسازی بیشتر گاسترین است. افزایش سطح گاسترین، خود باعث تحریک ترشح اسید از مخاط فوندوسی مترشحه اسید در بخش‌های پروگزیمال‌تر معده می‌گردد که نسبتاً عاری از التهاب هستند. افزایش بار اسید دوازدهه، آسیب مخاط دوازدهه را به دنبال خواهد داشت، و سبب ایجاد زخم و متاپلازی معده‌ای مخاط دوازدهه می‌گردد. متعاقباً مخاط متاپلاستیک می‌تواند با هلیکوباکتر پیلوری کلونیزه شود و این پدیده احتمالاً در فرایند ایجاد زخم نقش دارد. ریشه‌کنی عفونت موجب علاج طولانی‌مدت زخم‌های دوازدهه در بیش از 80 بیمارانی می‌شود که زخم آنها ناشی از مصرف NSAID نبوده است. داروهای گروه NSAID علت عمده زخم‌های منفی از نظر هلیکوباکتر پیلوری هستند.

باور محققین بر این است که زخم معده محصول آسیب مخاطی ناشی از هلیکوباکتر پیلوری است. همانند زخم‌های دوازدهه، ریشه‌کنی عفونت معمولاً بیماری را علاج می‌کند، به شرطی که زخم معده ناشی از NSAID نبوده باشد.



ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - شنبه ٢٧ آذر ۱۳۸٩

اریترومایسن ، پنی سیلین ، سولفونامید ، تتراسایکلین ، ونکومایسین و .... جز دسته ای بزرگ از ترکیبات شیمیایی هستند که باعث متوقف کردن رشد باکتریها (باکتریواستاتیک) و یا از بین بردن باکتری ها (باکتریوسیدال) در یک دوز پایین می شوند . در علم میکروب شناسی به این دسته از دارو ها که بروی باکتری ها اثر می گذارند آنتی بیوتیک می گویند . هر دسته از انتی بوتیک ها بر روی باکتری خاصی تاثیر دارد و این دارو ها بر روی ویروس و یا سایر میکروارگانیسم ها تاثیری نخواهند داشت . با این حرفا ،  این سوال در ذهن ایجاد می شود که ما از کجا بدانیم چه آنتی بیوتیکی بر روی چه باکتری هایی موثر است ؟ جواب سوال ما تست آنتی بیوگرام است که به صورت روتین در آزمایشگاه های میکروبیولوژِی انجام می گیرد . این تست به ما نشان می دهد که کدام یک از آنتی بیوتیک ها بر روی میکروب ما موثر است . همانطور که می دانید نمونه های گرفته شده برای بخش میکروبیولوژِی متفاوت هستند . اما نمونه ها هر چی که باشند (خون ، مایع مغزی-نخائی ، مدفوع ، ادرار ، خلط و..) در آخر  معمولا آنتی بیوگرام می شوند تا داروی موثر تجویز شود . در واقع باید بگوئیم که در عفونت های میکروبی آزمایشگاه دارو را تجویز می کند نه پزشک ...

 خلاصه ای از پروسه آنتی بیوگرام دیسک دیفیوژن

بعد از کشت نمونه دریافتی در محیط کشت مناسب ، اگر شرایط مناسب باشد و باکتری در نمونه ما باشد ، باکتری موجود در نمونه رشد خواهد کرد . بعد از رشد باکتری ، از ان لام (مقداری نمونه + سرم فیزیولوژِی) تهیه می کنیم و رنگ آمیزی گرم انجام می دهیم . اگر باکتری ایزوله ما ، جز باکتری های پاتوژن باشد ، باید تست آنتی بیوگرام را انجام دهیم . مقداری از نمونه را برداشته و  در محیط کشت آنتی بیوگرام کشت می دهیم ، سپس دیسک های آنتی بیوگرامی را روی محیط کشت گذاشته و جواب را بعد از ۲۴ ساعت برسی کرده و نتایج را گزارش می کنیم .

  • بعد از معرفی ابتدایی آنتی بیوگرام ، وارد بحث تخصصی آزمایشگاهی می شویم .

اصول آنتی بیوگرام

اصول آنتی بیوگرام بر پایه دو اصطلاح میکروب شناسی است یعنی :

  • Minimum Inihibitory Concentration (MIC)
  • Minimum Bactericidal Concentration (MBC )

منظور از MIC ، غلظتی از یک آنتی بیوتیک است که می تواند رشد باکتری را در شرایط آزمایشگاهی مهار کند. و منظور از MBC ، حداقل غلظتی از دارو است که باکتری را از بین می برد. در اغاز باید بگم که باید آزمایش کننده چهار اصل زیر را قبل از آغاز آنتی بیوگرام مشخص کند :

  • Which organisms to test?کدام ارگانیسم برای تست                                                        
  •  
  • What methods to use?کدام روش تست                                                               
  •  
  • What antibiotics to test?کدام آنتی بوتیک  
  •  
  • How to report results? چگونگی گزارش نتایج

روش های مختلف انجام تست تعیین حساسیت داروئی

  • Disk diffusion (Kirby Bauer)
  • Broth micro-dilution MIC (NCCLS متد رفرنس)
  • Etest

وسائل و موارد مورد نیاز برای تست انتی بیوگرام "دیسک دیفیوژن"

  1. محیط کشت که آنتی بیوگرام بر روی آن انجام می شود که "آگار مولر هینتون"می باشد .
  2. لوله حاوی نیم مک فارلند .
  3. لوله حاوی یک سی سی سرم فیزیولوژِی استریل
  4. دیسک های انتی بیوگرام
  5. باکتری خالص در محیط کشت مناسب
  6. سواب ، انس ، شعله ، هود ، چراغ
  • محیط نیم مک فارلند

محیط نیم مک فارلند محیطی در تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه خود را با ان مقایسه می کنیم . این محیط حاوی ۱.۵*۱۰۸ باکتری است . نحوه تهیه این محیط در آزمایشگاه به شرح زیر است :

روش تهیه محیط نیم مک فارلند

این محیط به مدت ۶ ماه در تاریکی و در ظرف در بسته که به وسیله اتش بسته شده است می تواند مورد استفاده قرار گیرد . اما با این اوصاف ، اگر در هر زمان رسوبی در لوله مشاهده شد ، محیط غیر قابل استفاده خواهد بود . زمانی که می خواهیم از این محیط استفاده کنیم باید انرا به خوبی حل بزنیم و جهت مقایسه کدورت لوله کشت با لوله مک فارلند، استفاده از یک زمینه سفید با خطوط سیاه و نور کافی توصیه می‌شود این اقدام بویژه جهت باکتریهایی مثل هموفیلوس، گنوکک و پنوموکک که در محیط آبگوشت به خوبی رشد نمی‌کنند توصیه می‌شود.

  • روش کار

روش های مختلفی برای تعیین حساسیت باکتری ها به انتی بیوتیک ها وجود دارد اما من در این قسمت تست روتین و ساده دیسک دیفیوژن (Disk diffusion ) را معرفی می کنم .

بعد از ایزوله کردن باکتری ، مقداری از کلونی باکتری را به وسیله انس (نه لوپ) برداشته و در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم . باید در نظر داشت که چون ، در تست آنتی بیوگرام میزان کدر بودن برای ما خیلی مهم است ، بنابراین در انتخاب مقدار نمونه باید دقت کنیم تا نمونه را بیشتر یا کمتر از نیم مک فارلند برنداریم . اگر میزان کدورت کمتر از نیم مکفارلند باشد ، مقداری دیگر از نمونه را در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم و یا اگر میزان کدر بودن ، بیشتر از نیم مک فارلند باشد در این صورت باید مقداری سرم فیزیولوژی استریل اضافه کرد تا به کدورت مناسب و برابر با نیم مک فارلند برسیم . بعد از تهیه محلول هموژن خود ، با سواب استریل محلول را به هم زده و بعد از آبکشی کردن سواب ، (برای آب کشی ، سواب را با قدرت به دیواره لوله تکیه داده و فشار دهید تا آب آن گرفته شود .) آن را به محیط کشت مولر هینتون انتقال می دهیم و به طور کامل به وسیله سواب ، محیط کشت را به صورت چمنی کشت می دهیم به طوری که هیچ محلی در محیط از قلم نیافتد  . بعد از کشت ، دیسک های انتی بیوگرام که قبل از نیم ساعت از تست ، بیرون یخچال قرار داده شده اند را انتخاب و بر روی محیط کشت انتقال می دهیم . باید ذکر کنم که نحوه قرار دادن دیسک ها در محیط کشت مولر هینتون ، به صورت دایره ای  است و فاصله این دیسک ها از هم دیگر حدود 12 میلیمتر باشد و باید از دیواره هم فاصله داشته باشند . در ضمن فاصله این دیسک ها را می توان با توجه به تجربه خود کم و یا زیاد کنیم . دیسک های مورد استفاده هم باید با نوع باکتری ایزوله شده ما مناسب باشد مثلا هیچ وقت برای باکتری گرم منفی ، پنی سیلین قرار نمی دهیم چون نسبت به آن مقاوم هستند و یا اینکه آنتی بیوتیک کلروامفینیکل را برای کشت ادرار قرار نمی دهیم چون این انتی بیوتیک نمی تواند وارد مجاری ادراری شود و... بعد از قرار دادن دیسک ها ، در پلیت را بسته و به مدت 24 ساعت آنها را در دمای 37 درجه سانتیگراد ، انکوبه می کنیم (لازم به ذکر است که بنابه به تحقیقات تازه محقین ، دمای انکوبه برای آنتی بیوگرام به ۳۵ درجه کاهش یافته است و مدت زمان آن هم به ۱۶ تا ۱۸ ساعت کاهش یافته است ) . بعد از 24 ساعت پلیت را زیر چراغ برسی می کنیم  .آنگاه می‌باید قطر هاله عدم رشد را با خط‌کش اندازه گیری کرد و با توجه به جدول همراه دیسک ها ، گزارش تست انتی بیوگرام خود را برای هر یک از انتی بیوتیک ها ، به صورت حساس (Susceptible ) ، مقاوم (Resistant) و یا نیمه حساس (Intermediate) گزارش می شود .

نحوه خواندن و گزارش کردن

بعد از انکوبه ، محیط ما باید به صورت زیر باشد :

آنتی بیوگرام

همان طور که مشاهده می کنید در اطراف برخی از دیسک ها هاله روش وجود دارد که این نشان دهنده حساس بودن ان بکتری به ان دیسک است و باید حساس گزارش شود . همچنین در اطراف بعضی از دیسکها هیچ گونه هاله ای نیست در این حالت این باکتری را باید نسبت به ان دیسک مقاوم گزارش داد . اگر طبق جدول خود هیچ یک از حالات فوق مشاهده نشود در اینصورت نیمه حساس را گزارش می کنیم .

و چند نکته مهم  :

  • در اندازه گیری از خط کش معمولی و یا ویژه این کار استفاده کنید .
  • همیشه امتداد خط کش باید از وسط دیسک عبور کند .
  • همیشه قطر اندازه گیری می شود .
  • باید در تست انتی بیوگرام ، نگاه بدبینانه ای داشت . یعنی اینکه کوتاهترین مسیر را برای تعیین حساسیت انتخاب می کنیم .
  • اگر در اطراف دیسک خط هایی کشیده شده باشد در این صورت باید از اخرین خطی که بعد از ان دیگر کلونی نیست تعیین حساسیت کرد.
  • اگر در اطراف دیسک حتی یک کلونی هم باشد باید از همان جا تا دیسک را اندازه گیری کرد نه کل هاله را .
  • همیشه به محل هاله دقت کنید بازم می گم همیشه و کوتاهترین مسیر ار انتخا کنید .
  • دیسک ها و هاله ها را در زیر نور برسی کنید .

 محیط کشت در آنتی بیوگرام

محیط مورد استفاده در روش دیسکی مولرهینتون است که باید pH آن بین 4/7-2/7 تنظیم شده باشد .
و در پلیت به قطر 100 میلی متر حدود 30-25 میلی لیتر محیط مولر هینتون میریزیم و قطر مورد نظر حاصل می‌گردد. جهت اجتناب از خشک شدن سطح محیط باید پلیتها را در کیسه‌های پلاستیکی نگهداری نمود.پس از تلقیح محیط آنتی بیوگرام در فاصله حداکثر 15 دقیقه می‌باید دیسکهای آنتی بیوتیک را در سطح آگار با فاصله مناسب از یکدیگر  قرار داد.سپس به مدت 18-16 ساعت در انکوباتور 35 درجه سانتی‌گرام نگهداری نمود. روشهای اصلاح شده در باکتریهای سخت رشد نیز یکی دیگر از روش ها است در بعضی از باکتریهای سخت رشد از محیط های کشت اختصاصی استفاده می شود مانند : محیط کشت HTM در هموفیلوس ها .
 
نکات بسیار مهم در آنتی بیوگرام
  • تست همیشه در زیر هود و در کنار شعله انجام شود .
  • باکتری ایزوله شده باید ، خالص رشد کرده باشد .
  • در زمان برداشت نمونه باید سعی شود که از یک کلونی برداشت شود .
  • قبل از انتقال سواب به محیط کشت مولر هینتون ، محیط کشت را از عدم رشد کلونی های باکتری در محیط کشت مولر هینتون برسی کنیم . اگر کلونی در محیط کشت دیده شد ، محیط را عوض می کنیم .
  • همیشه به وسیله انس نموه را برداشته و سپس به لوله حاوی سرم فیزیولوژی استریل اضافه کنید .
  • برای اینکه به کدروت مورد نظر نیم مک فارلند دست یابید ، از مقادیر کم کلنی شروع کنید و یا کلونی را ابتدا به دیواره لوله انتقال دهید و سپس کم کم کلونی را به محیط آبگوشت اضافه کنید تا به کدورت مورد نظر دست یابید .
  • همیشه بعد از باز کردن در لوله و بعد از بستن ان ، سر لوله را در معرض شعله قرار دهید .
  • اگر پنبه سر لوله ها ، به سطح هود افتاد باید آنها را دور انداخت .
  • اگر سوآب را به خوبی آب گیری نکنیم در این صورت به علت تبخیر مایع بالایی در انکوباسیون ممکن است رطوبت در سر طرف مولر هینتون قرار گیرید .
  • همیشه بعد از اینکه محیط کشت را با سواب کشت چمنی دادیم ، سواب را به ظرف حاوی مواد ضد عفونی یا استریل کننده انتقال دهیم .
  • اگر نمونه مورد نظر ما مشکوک به سودوموناس است (بوی شبیه گل یاس) در این صورت سواب را ایتدا در روی ضعله قرار دهید و سپس به محیط ضد عفونی کننده انتقال دهید .
  • هیچ وقت سواب را به دور محیط کشت حرکت ندهید .
  • همیشه قبل از باز کردن محیط کشت ، سر پلیت را با ضعله ضد عفونی کنید .
  • برای راحتی کار ، ایتدا دیسک ها را بر روی پلیت تعیین مکان کنید و سپس به محیط اضافه کنید .
  • تا زمانی که دیسک ها را در روی محیط مولر هینتون ، فشار نداده اید می توانید جای انها را تغییر دهید . اما بعد از فشار هیچ وقت نباید آنها را تغییر داد .
  • همیشه دیسک ها را از بالا توسط یک گیره به محیط اضافه کنید .
  • فبل از گذاشتن دیسک سعی شود که هر دو طرف را برسی کنید تا اگر دیسک حاوی نام نباشد ، از به کار گیری ان خودداری کنید .
 
خطا های تست انتی بیوگرام
  • اگر بیشتر از یک کلونی برداشت شود ، نتیجه تست ما کلا اشتباه خواهد بود . چون در این صورت با تست آنتی بیوگرام ، چند کلونی را از نظر حساسیت برسی کردیم که ممکن است یک کلنی حساس باشد و دیگری نه . پس دقت شود .
  • اگر محیط کشت ما بعد از انکوبه ، به صورت خط خطی باشد نشان دهنده این است که مقدار کلونی ماکمتر از نیم مک فارلند بود .
  • اگر در دور تمام دیسک ها هاله تشکیل شد و یا در اطراف هیچ یک از دیسک ها هاله ای تشکیل نشد برای برسی نتایج باید تست را تجدید کرد .
  • اگر PH محیط مولر هینتون مناسب نباشد نتایج ما اشتباه خواهد بود .
  • نگه داری غلط دیسک ها و استفاده از محیط های تاریخ گذشته موجب خطا می شود .
  • تهیه اشتباه محیط نیم مک فارلند هم میتواند باعث اشتباه شود .
  • تأخیر زیاد بین استاندارد کردن کدورت کشت و تلقیح پلیت
  •   همراه بودن سواب با مقدار زیادی مایع آبگوشت به هنگام تلقیح محیط آنتی بیوگرام (نگرفتن مایع اضافی با جدار لوله)


  • دیسک های مورد استفاده در آنتی بیوگرام

همان طور که در بالا هم گفتم ، باید از دیسک های مناسب باکتری ایزوله شده استفاده کرد . انتخاب نوع دیسک ها بسیار مهم است چون از یک طرف باید قضیه مقاوت داروئی را در نظر بگیریم و از طرف دیگر باید سلامت فرد را هم در نظر بگیریم برای نمونه :

بسیاری از باکتری ها کم کم به آنتی بیوتیک ها مخلفت مقاوم می شوند که این می تواند عمر آنتی بوتیک ها را کم کم به سوی افول هدایت کند .

و یا اینکه مصرف خود سر و یا اضافی که حاصل اشتباه فردی و یا اشتباه تکنیکی در تست انتی بیوگرام است می تواند عوارض گوناگونی داشته باشد . مثلا استفاده زیاد از سولفونامید ها باعث بیماری های عصب شنوایی و یا بیماری های کلیوی خواهد شد و یا اینکه مصرف زیاد پنی سیلین باعث تروبوسایتوپنی و مصرف زیاد تتراسایکلین باعث گرانولوسیتوپنی خواهد شد .

  • نگهداری دیسک ها : دیسک ها باید در یخچال و یا در فریز نگه داری شوند . اگر دیسک ها به صورت STOCK هستند در دمای فریز باید نگه داری شوند اما دیسک ها به صورت روتین تا یک ماه در دمای یخچال نگه داری می شوند .
  • کنترل کیفی :  به کمک سوشهای استاندارد و با مراجعه به جدول مربوطه می‌بایست نسبت به کنترل کیفی روند آنتی بیوگرام اقدام نمود.

چند نکته :

اگر باکتری ایزوله شده کوکسی گرم مثبت مانند استافیلوکوک طلائی (اورئوس) باشد در این صورت دو دیسک کلیندامایسن و اریترومایسن را در کنار هم و مقداری نزدیک تر قرار می دهیم . چون کلیندمایسن باعث می شود تا ژن القا کننده در اریترومایسن فعال شود . در واقع دیسک کلیندمایسن فعال کننده ژن خاموش اریترومایسن است .

  • آمینوگلیکوزید ها بر روی باکتری های بی هوازی تاثیر می گذارند .
  • کلروامفینیکل در نمونه ادراری استفاده نمی شود چون وارد ادرار نمی شود .
  • ونکومایسن ، اریترومایسن ، کلیندمایسن ، پنی سیلین و چند تا دیگه بر روی باکتری های گرم مثبت تاثیر می ذارند .
  •  دیسک ایمیپنم هم برروی گرم مثبت و هم بر روی گرم منفی تاثیر دارد ولی باید در عفونت های شدیدی استفاده شد تا مقاومت ایجاد نشود .
  • سفالکسین که بر روی گرم مثبت و منفی تاثیر دارد به صورت خوراکی است .
  • تتراسایکلین آنتی بوتیک وسیع الطیفی است و معمولا به صورت موضعی استفاده می شود .

در اخر هم باید ذکر کنم که دیسک ها را بر اساس نوع بیمارستان و یا نوع محل تست می توان تغییر داد و یا مکان و فاصله انها را هم تغییر داد و این که بسیاری از مراحل تست به صورت عالی انجام گیرند باید تجربه کافی داشت و همیشه سعی کنید که به بهترین نحو کار خود را انجام دهید .


جدول آنتی بیوتیک ها



ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - چهارشنبه ٢۱ مهر ۱۳۸٩

 از میکروبهای سودمند یا در اصطلاح پروبایوتیک می توان برای درمان نوعی آلرژی تنفسی موسوم به تب یونجه بهره گرفت.

جدیدترین شماره نشریه پزشکی آلرژی بالینی و تجربی نوشت: مصرف روزانه نوشابه های حاوی باکتری های سودمند یا در اصطلاح پروبایوتیک ، علایم حساسیت های تنفسی را در مبتلایان به تب یونجه کاهش می دهد.

به گفته پژوهشگران : استفاده از پروبایوتیک ها از طریق تغییر و تنظیم پاسخ دستگاه ایمنی بدن به مواد حساسیت زا نظیر گرده گل ها از بروز علایم آلرژی پیشگیری می کند.

دانشمندان امیدوارند با تکمیل این بررسی به راهکار مناسبی برای پیشگیری و درمان بسیاری از بیماری های حساسیتی دست یابند.

نویسنده: افضل نیا - سه‌شنبه ۳٠ شهریور ۱۳۸٩

اریتراسما  Erythrasma

تعریف:

عفونت مزمن طبقه شاخی پوست بوده و معمولا چین های بدن از جمله بین انگشتان پا ، کشاله ران و نواحی پری آنال ، زیر پستان ها و زیر بغل را گرفتار می سازد . ضایعات بیماری بصورت لکه ها یا ماکول های قرمز ، قهوه ای و یا قرمز مسی خشک و بدون ترشح و التهاب و بدون پوسته ریزی می باشند ممکن است پوسته ها یا شوره های ریزی در سطح ضایعات دیده شود .


ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - سه‌شنبه ٢۳ شهریور ۱۳۸٩

 

 

سیاه زخم چیست؟

عامل آن باسیل بزرگ گرم مثبت با توانایی تولید اسپور میباشد. که اسپور نسبت به شرایط سخت محیطی بسیار مقاوم بوده و مدت طولانی در هوا و بویژه خاک زنده میماند. باسیل آنتراکس در حیوانات بیشتر دیده می شود لذا افرادیکه در تماس بیشتر با حیوانات و فرآورده های حیوانی آلوده قرار دارند، بیشتر گرفتار میشوند.


ادامه مطلب ...
نویسنده: افضل نیا - یکشنبه ٢۱ شهریور ۱۳۸٩

آزمایش پیشگیرانه سل ارائه می شود  .

پژوهشگران می گویند یک گام به سوی ارائه آزمایش خون پیشگیرانه سل نزدیک تر شده اند. 
   
 
به گزارش خبرنگار سایت پزشکان بدون مرز به نقل از ایندیپندنت ، بررسی اثر دی ان آ در خون می تواند تشخیص دهد کدام یک از ناقلان سل ، نشانه های این بیماری را بروز داده و عفونت را گسترش می دهند.
این آزمایش می تواند به تشخیص زودهنگام سل و ارائه درمانی برای این بیماری ریوی منجر شده و جان انسانهای بسیاری را از مرگ نجات دهد.
آزمایش های کنونی و رایج خون و پوست فقط می تواند نشان دهد که آیا فردی حامل سل است یا خیر، اما علایم آن را نشان نمی دهد. از سوی دیگر با شیوه های رایج پیش بینی اینکه چه کسی به نوع پیشرفته بیماری مبتلا می شود غیر ممکن است.
محققان انگلیس، آمریکا و آفریقای جنوبی نشانگرهای ژنتیکی را در خون ۱۰ درصد فرد مبتلا به سل فعال شناسایی کردند.
دکتر آن او گارا سرپرست این تحقیقات گفت: پیش بینی اینکه کدام ناقل سل به بیماری پیشرفته مبتلا خواهد شد، می تواند نتایج مهم و چشمگیری در پیشگیری از همه گیری این بیماری داشته باشد.
این محققان می گویند شیوه جدید تشخیصی بر اساس آزمایش خون؛ می تواند به ویژه در مبتلایان به ایدز و سل مهم باشد، چرا که شیوه معمول تشخیص بیماری با آزمایش خلط اغلب کارایی ندارد.
اوگارا افزود: این آزمایش خون اگرچه بسیار امیدوار کننده است، اما به تحقیقات بیشتری نیاز دارد.

نویسنده: افضل نیا - یکشنبه ۱٠ امرداد ۱۳۸٩

ژلوز صفرا-اسکولین برای باکتروئیدز Bacteriodes Bile Esculin(BBE) Agar

باکتروئیدز صفرا-اسکولین آگار یک محیط ژلوزدار انتخابی افتراقی است که برای بدست آوردن باکتری های گروه باکتروئیدز فرازیلیس مورد استفاده قرار می گیرد.این محیط حاوی صفرا،اسکولین،سیترات آمونیوم فریک،همین،ویتامین K و برخی اوقات جنتامایسین، همراه با یک پایه آگار حاوی دانه سویا می باشد.رشد ارگانیسم های غیر از گروه باکتروئیدز فراژیلیس بوسیله صفرا و جنتامایسین مهار می گردد.افزودن همین و ویتامین K1  به آگار سبب کامل شدن آن می گردد،رشد گونه های باکتروئیدز راتحریک می کند.هیدرولیز اسکولین با تبدیل اسکولین به اسکولیتین و بر اثر واکنش با سیترات آمونیوم فریک و ایجاد کلنی های سیاه رنگ تشخیص داده می شود.


نویسندگان وبلاگ:
مطالب اخیر:
دوستان من:
کدهای اضافی کاربر :