─=≡Ξ║ علوم آزمایشگاهی ║Ξ≡=─
صفحات وبلاگ
نویسنده: افضل نیا - سه‌شنبه ٢٠ اردیبهشت ۱۳٩٠

Coobs test(تست کومبس)

برای تشخیص آنتی بادی های ناقص که نمی توانند آنتی زن های نامحلول(سلولی)را به یکدیگر متصل کنند و واکنش قابل رویت در محیط سرم فیزیولوزی به صورت آگلوتیناسیون ایجاد کنند چند راه وجود دارد :

1.     استفاده از سرم آلبومین گاوی که باعث کاهش نیروهای دافعه بین انتی ژن ها می شود

2.     استفاده از بعضی آنزیم ها که بار منفی سطح بعضی سلول ها را کاهش می دهد(حذف اسید سیالیک با بار منفی)

3.     استفاده از سرم کومبس یا سرم آنتی گلبولین که آنتی ژن های پوشیده شده از آنتب بادی های ناقص را بهم می چسباند.

از جمله آزمایشات روتین برای تشخیص آنتی بادی های ناقص عبارتند از :

کومبس رایت برای تشخیص آنتی بادی های ناقص ضد بروسلا ها در بروسلوز مزمن ، کومبس کراس مچ و کومبس مستقیم و غیر مستقیم.

* آنتی بادی های ناقص اکثرا از کلاس IgG می باشند مانند اتوآنتی بادی های گرم و یا آنتی بادی ضد سرم Rh

کومبس مستقیم/غیرمستقیم


Direct coombs (کومبس مستقیم)

برای تعیین آنتی بادی های ناقص متصل بر سطح گلبول های قرمز خون می باشد که در موارد زیر کاربرد دارد:

الف:بیماری های همولیتیکی نوزادان یا erythroblastosis fetalis  که به علت ناسازگاری  خونی خصوصا Rh بین مادر و جنین است.

ب:بیماری کم خونی اتوایمیون hemolytic anemia  ناشی از تولید اتو انتی بادی علیه گلبول های قرمز خودی است.

ج:کم خونی ناشی از مصرف بعضی داروها که با اتصال بر روی گلبول های سرخ تولید اتو آنتی بادی می کنند که به گلبول های قرمز صدمه می زند.

د:واکنش های ناشی از انتقال خون سازگار

ه:واکنش های ناشی از عفونت های ویروسی  و یا علل ناشناخته

اساس آزمایش : هماگلوتیناسیون

روش آزمایش :

خون با ماده ضد انعقادی EDTA تهیه می شود.

EDTA  با گرفتن یون کلسیم در خون از فعالیت سیستم کمپلمان جلوگیری می کند.(کلسیم برای فعال شدن کمپلمان ضروری است).مثال: خون بند ناف نوزاد برای تشخیص بیماری همولیتیکی نوزادان- خون تهیه شده 3 بار با سرم فیزیولوزی شسته می شود- سوسپانسون 2 تا 5 درصد تهیه شده یک قطره از سوسپانسون گلبولی در یک لوله ریخته شده روی آن 2 قطره سرم کومبس می افزاییم.چند دقیقه در حرارت آزمایشگاه مانده سپس یک دقیقه با دور 1000 سانتریفیوژ می کنیم و جواب را با تکان دادن لوله می خوانیم در صورت مشکوک  بودن جواب ، نمونه را روی لام ریخته و با لامل زیر میکروسکوپ مشاهده می کنیم.

   Indirect coombs ( کومبس غیر مستقیم )

تعیین انتی بادی های ناقص در سرم مورد آزمایش است.

موارد کاربرد :

الف:تعیین آنتی بادی های ناسازگار در سرم(مانند Rh در مادران Rh  منفی بر علیه گلبول های Rh  مثبت جنین)

ب: تعیین اتوانتی بادی ضد گلبول قرمز در نتیجه مصرف دارو

د:آنتی بادی های حاصل از واکنش های ناشی از انتقال خون ناسازگار

روش آزمایش:

ابتدا سوسپانسیون 2 تا 5 درصد از گلبول های شسته شده که باید دارای انتی ژن گروه خونی که سرم بیمار احتمالا آنتی بادی آن دارد، تهیه کنیم.مثال :گلبول های سرخ (o ) Rh مثبت برای تعیین آنتی Rh در سرم مادر Rh منفی خون  o  درمورد تشخیص آنتی Rh انتخاب می شود زیرا انتی ژن های A و B را ندلرد و آنتی بادی های طبیعی ضد A  و B  در جریان آزمایش دخالت نخواهند کرد.ابتدا گلبول های سرخ را شسته  و سوسپانسون 2 تا 5 درصد تهیه می کنیم.

مقادیر هم حجم ( ٠/١ سیسی سرم مورد ازمایش + ٠/١ سی سی گلبول سرخ) از سرم گلبول قرمز را در لوله ازمایش ریخته و به مدت یک ساعت در اتو 37 درجه سانتی گراد و یا نیم ساعت در بن ماری 37 درجه قرار می دهیم تا در این فرصت انتی بادی های احتمالی بر روی گلبول های سرخ O+  متصل شوند و گس از اتمام مدت گلبول ها را 3 بار با سرم فیزیولوزی شسته و از رسوب سلولی یک سوسپانسیون 50 درصد تهیه می کنیم.بر روی ان دو قطره سرم کومبس می افزاییم و پس از سانتریفیوز ( یک دقیقه دور 1000) نتیجه را می خوانیم.

اندازه گیری عیار انتی بادی (تست کمی ) در طول بارداری مادر Rh  منفی انجام می شود نا در صورت بالا بودن تیتر آنتی بادی اقدام لازم صورت گیرد.در تست کمی یک سری رقت از سرم تهیه می کنیم (١/٢، ١/۴ ، ١/٨ ، ١/١۶ ، ...) با هر رقت تهیه شده یک تست انجام می شود.آخرین رقتی که ایجاد اگلوتیناسیون بنماید عیار یا تیتر آنتی بادی ناقص می باشد.عیار 64/1 و بالاتر می تواند باعث واکنش های همولیتیکی در جنین یا نوزاد می گردد.

جواب مثبت کاذب : پدیده رولو و الودگی ظروف و یا معرف ها

جواب منفی کاذب : حداقل 200 تا 500 مولکول آنتی بادی بر سطح هر گلبول قرمز باید متصل باشد تا انتی بادی (سرم کومبس) بتواند عمل کند.عدم وجود مولکول های آنتی بادی به اندازه کافی و یا جداشدن آنتی بادی ها از سطح گلبول های قرمز در اثر شستشوی بیش از اندازه می تواند جواب منفی کاذب ایجاد نماید-گاهی ممکن است به علت شسته نشدن گلبول های قرمز و وجود پروتئین های موجود در خون و یا باقی ماندن آنتی بادی های آزاد ، سرم کومبس خنثی شده و جواب منفی کاذب می دهد.ضعیف بودن سرم کومبس نیز جواب کاذب می دهد.

زآآ

نویسندگان وبلاگ:
مطالب اخیر:
دوستان من:
کدهای اضافی کاربر :